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  全基因组扩增 REPLI-g UltraFast Mini Kit

 

用于从珍贵或少量样本中超快速高度均一地进行全基因组扩增

 

· 快速程序,仅需1-1.5小时

· 高度均一的扩增获得可靠、无偏倚的结果

· 从各种起始样本中进行高度重复的扩增

· 简单的扩增,无需定量

· 标准化、稳定的DNA产量

 

REPLI-g UltraFast Mini Kit用于从各种样本中进行高度均一的全基因组扩增,仅需60-90分钟。即使是微量样本,新型的REPLI-g UltraFast DNA 聚合酶也能快速、准确地扩增基因组,得到的DNA可直接用于各种基因分析。 

原理

REPLI-g UltraFast 技术实现超快速、高度均一的全基因组扩增,得到的结果序列误差低至可忽略(1)。这种方法基于多重置换扩增(MDA)技术--等温基因组扩增采用新型独特进行性的DNA聚合酶Phi29,仅需很短时间 1.5 小时,即可得到DNA产物,平均长度可达10 kb。多数片段长度分布在 2 kb -100 kb之间。同时可避免PCR扩增方法常见的高度序列偏差。此外,独特的碱性变性缓冲液确保温和的基因组DNA变性,避免了高温变性导致的DNA模版的断裂,确保在下游实验中得到更灵敏、更可靠的结果。

操作流程

使用REPLI-g UltraFast Mini Kit扩增基因组DNA涉及三个基本步骤(见流程图)。首先,将样品(10 ng纯化的基因组DNA,0.5 μl全血或300个组织培养细胞)进行温和的碱性变性,避免DNA模版的破坏和断裂。接下来,中和碱性样品,最后加入REPLI-g UltraFast DNA Polymerase,并在30°C孵育。60分钟后,扩增好的DNA可以立即使用而不需要进一步的纯化。90分钟后,20 μl 反应体系中DNA的平均产量为10 μg。如果时间十分有限,仅需反应45分钟即可获得足够下游基因分析的产物(见图"Consistent and High Yields of Amplified DNA")。

可靠的对照反应

阴性对照样本(无模板DNA)没有扩增,可作为可靠的参照物,用来显示反应中是否存在样本或是否有DNA污染(见图"Consistent and High Yields of Amplified DNA")。

应用

REPL-g 扩增获得的基因组DNA适合各种下游应用,包括:

· SNP和STR基因分型

· RFLP和Southern 印迹分析

· 比较基因组杂交(CGH)

· PCR 和 real-time PCR

· 芯片分析

参考文献

Hosono, S. et al. (2003) Unbiased whole-genome amplification directly from clinical samples. Genome Res. 13, 954.

 

订货信息

 

Cat. no.

Name

Details

150033

REPLI-g UltraFast Mini Kit (25)

DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 25 x 20 μl ultrafast whole genome amplification reactions

150035

REPLI-g UltraFast Mini Kit (100)

DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 100 x 20 μl ultrafast whole genome amplification reactions




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