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  QuantiFast Probe PCR Kits

QuantiFast Probe PCR Kits

快速real-time PCR和两步法RT-PCR,使用序列特异性探针

快速获得结果,节约至60%的时间

通用的操作流程用于标准的和快速的定量PCR仪

可特异性检测低拷贝的模板

准确检测各种起始量的模板

优化的即用型预混液用于快速循环

 

原理

QuantiFast Probe PCR Kits 可缩短60%的PCR运行时间(见图"Significantly reduced PCR times"),更快获得结果。可以明显提高您的样品通量,您也可以同其他用户共用PCR仪。特制的快速PCR缓冲夜含有正在申请专利的添加剂Q-Bond,可明显缩短变性、退火和延伸 时间(见图 "Fast primer annealing")。缓冲液同时含有HotStarTaq Plus DNA Polymerase,在95°C 条件下只需3分钟激活。

应用QuantiFast Probe PCR Kits,无论是标准还是快速PCR仪,您可以按照同样的流程操作。快速PCR不会影响PCR表现(见图"Faster results without compromising sensitivity on the ABI PRISM 7900")。

QuantiFast Probe PCR Kits灵敏度高,表现有趣其他 real-time PCR试剂盒(见表格"Sensitive two-step RT-PCR on the iCycler iQ" 和图"Sensitive two-step RT-PCR on the ABI PRISM 7900")。 快速PCR缓冲液中KCl 和 NH4Cl 的平衡组合可促进高度特异的引物延伸,确保高度特异、高度灵敏的PCR分析。此外,HotStarTaq Plus DNA Polymerase确保高度严谨的热启动,避免形成非特异性产物。

Sensitive Two-Step RT-PCR on the iCycler iQ

Triplicate reactions were run using a Primer Express designed TaqMan assay for 

IL8 (a chemokine). The QuantiFast Kit provided lower CT values than the kit from 

Supplier BV (which was used according to a fastcycling protocol), allowing transcript 

quantification from just 1 ng cDNA.

 

流程

QuantiFast Probe PCR Kits 是即用型预混液,无须优化反应和循环条件。按照操作手册上的流程即可快速获得可靠的结果。试剂盒提供含有和不含ROC参比染料的预混液(见表格"Choosing the right QuantiFast Probe PCR Kit")。由于ROX浓度经优化,对低拷贝序列也可进行自动化分析。

Choosing the right QuantiFast Probe PCR Kit

* ROX 必须加至预混液中。
 ROX 染料可加入预混液中。
 不需要ROX 染料。


Components of 2x QuantiFast Probe PCR Master Mix

组分

特点和优点

HotStarTaq Plus DNA Polymerase

95ºC 条件下3分钟内快速、高度严谨的热启动。

QuantiFast Probe PCR Buffer

独特的缓冲夜组分,包括可缩短变性、退火和延伸时间的Q-Bond,平衡的离子组成促进特异性引物退火。

dNTP Mix

dATP、dCTP、dGTP和dTTP混合物。

ROX 染料*

在Applied Biosystems 和Stratagene 仪器上校正荧光信号,任何real-time PCR仪上不会对PCR造成干扰。

* ROX 染料混合在预混液中或单独提供,见表格"Choosing the right QuantiFast Probe PCR Kit"

2x QuantiFast Probe PCR Master Mix可保存在 2-8ºC条件下,可更快地构建反应体系,无需解冻反应组分。

应用

QuantiFast Probe PCR Kits与所有real-time PCR仪兼容,包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Corbett、Eppendorf、Roche和 Stratagene的仪器。

为获得最佳的两步法RT-PCR结果,我们推荐应用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。该试剂盒可在20分钟内快速合成cDNA,同时去除基因组DNA的污染。还可使用 FastLane Cell cDNA Kit,该试剂盒可直接从培养细胞中制备cDNA,无需RNA纯化。如果只有微量的RNA模板,我们推荐使用 QuantiTect Whole Transcriptome Kit 制备cDNA存档,可均一地扩增靶基因,确保可靠的基因表达分析。

对于标准的PCR分析,我们推荐使用QIAGEN Fast Cycling PCR Kit,该试剂盒同QuantiFast Kits基于同样的技术,可在任何PCR仪上运行快速、高度特异的PCR。

 

Significantly reduced PCR times.

The QuantiFast SYBR Green PCR Kit reduces total PCR run time by up to 60% in real-time two step RTPCR on standard cyclers (40 cycles without melting curve analysis; comparison with 

standard QIAGEN real-time PCR kits). L: LightCycler 2.0; A1: ABI PRISM 7900; A2: Applied Biosystems 7500; 

A3: ABI PRISM 7000.

 

Fast primer annealing. A  Q-Bond in QuantiFast Buffer increases the affinity of DNA polymerase for short single-stranded DNA, reducing primer annealing time to a few seconds. In addition, the unique 

buffer composition supports the melting of DNA, reducing denaturation and extension 

times.  B  Without QBond, the primer and polymerase bind sequentially to the template, i

ncreasing primer annealing time.

 

Faster results without compromising sensitivity. Reactions were run in duplicate 

using 10fold dilutions of human leukocyte cDNA (100 ng to 0.01 ng) and a TaqMan gene 

expression assay for IL1RN (a cytokine) on the ABI PRISM 7900. The QuantiFast Kit showed 

greater sensitivity than the standard cycling kit from Supplier AII (which was used according 

to the standard cycling protocol), providing much lower CT values and transcript quantification 

from down to 10 pg cDNA.   

 

Sensitive two-step RT-PCR. Reactions were run in triplicate using 10-fold dilutions of human leukocyte cDNA (100 ng to 0.01 ng) and a Primer Express 

designed TaqMan assay for IL8 (a chemokine) on the ABI PRISM 7900. A The QuantiFast 

Kit showed greater sensitivity than B the kit from Supplier I (which was used according to 

the standard cycling protocol), providing lower CT values and transcript quantification 

from down to 0.01 ng cDNA. 

 

Wide dynamic range and high sensitivity. The QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit 

provided accurate gene expression analysis from low to high template amounts with a 

PCR efficiency of 93% in twostep PCR on the Mastercycler ep realplex. Duplicate 

reactions (25 μl volume) were performed using 10fold dilutions of human leukocyte  cDNA and a Primer Express designed TaqMan assay for ubiquitin (a regulatory protein). 

NTC: no template control.

 

Detection over 7 logs of template. Duplicate two-step RT PCR reactions were run using a set of primers and FRET probes for β-2 microglobulin from Supplier R on the LightCycler 2.0. The amplification plots for the 

QuantiFast Kit show the kit's wide dynamic range.

 

Specific primer annealing. A balanced combination of KCl and (NH4)2SO4 promotes specific annealing of primers and probes to the PCR template. K+ binds 

to phosphate groups on double stranded DNA, stabilizing annealing of primers and probes. NH4+ destabilizes weak

 hydrogen bonds between mismatched bases.

 

 

Cat. no.

Name

Details

204257

QuantiFast Probe PCR Kit (4000)

For 4000 x 25 ul reactions: 2 x 25 ml 2x QuantiFast 

Probe PCR Master Mix (contains ROX dye), 20 ml RNase-Free Water

 

 

 




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